SDS-PAGE凝膠制備試劑盒操作步驟

SDS-PAGE Gel Kit

SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

目錄號：K0022

組分說明及保存條件

本產(chǎn)品所提供的APS（過硫酸銨）為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制10%APS溶液（0.5 g APS加5ml雙蒸水、2.5  g APS加25ml雙蒸水），將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

            本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡介

　　本產(chǎn)品包括SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質(zhì)量

各種濃度的變性PAGE凝膠，方便、快捷。本試劑盒在分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中

已加入10%SDS,使用時(shí)不用另外加入。

注意事項(xiàng)

1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定，應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，每

   次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長，應(yīng)考慮更換使用

   -20度保存的10%APS。

2.  PAGE凝膠的凝聚速度與溫度以及APS、TEMED的用量密切相關(guān)；在其它條件不變

   的情況下，可通過改變APS及TEMED的用量，控制PAGE凝膠的聚合速度，凝膠聚

   合過快不利于操作；附表中的 APS及TEMED量可供參考，應(yīng)根據(jù)實(shí)際操作情況做

   適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

3.  在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

4.  在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要小心操作，加水時(shí)速度不能太快。

5.  丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時(shí)請穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。

6.  本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。

操作步驟

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，膠濃度請參考附表1。

 I 灌制分離膠（各試劑使用量請參考附表3）

1．參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。

注：加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。

2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。

3．加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對于 mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端

   1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，

   使凝膠表面保持平整。

5．靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

 II灌制濃縮膠（各試劑使用量請參考附表2）

1．去除覆蓋在分離膠上的水層。

2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個(gè)小燒杯或試管中混

   合。

3．加入10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4．將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

5．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

6．靜置10~20分鐘，等待濃縮膠聚合。

7．待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

8．進(jìn)行常規(guī)電泳操作。

附表

  附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與建議分離范圍         

附表2.配制5%SDS-PAGE濃縮膠

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