兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒說明書

    SPRabbit&MouseHRPKit

    Cat.No.K0120

    保存：2-8℃

    組分說明

                                   Cat.No.                        K0120     K0120A

                                    KitSize                          3ml       18ml

內(nèi)源性過氧化物酶封閉液（試劑1，白色液體）                         3ml       18ml

封閉用正常羊血清工作液（試劑2，白色液體）                        3ml       18ml

生物素標(biāo)記羊抗兔/鼠二抗工作液（試劑3，黃色液體）        3ml       18ml

HRP標(biāo)記的鏈霉親和素（試劑4，紅色液體）                            3ml       18ml

*本試劑盒僅適用于一抗為兔源或鼠源抗體的IHC實驗

    產(chǎn)品簡介

      本試劑盒根據(jù)生物素(Biotin)與鏈霉親和素(Streptavidin)具有很強親和力的原理設(shè)計。在兔源或鼠源的一抗與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后，本試劑盒中的生物素化抗·兔/鼠通用型二抗與一抗特異結(jié)合；二抗上標(biāo)記的生物素與標(biāo)記了過氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結(jié)合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。HRP可以催化底物顯色，從而推斷待檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用優(yōu)化的標(biāo)記和純化技術(shù)，使得其染色有更高靈敏度和更低的背景，適合于檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，以及冰凍切片、細(xì)胞爬片、新鮮制備的血涂片等。兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒適合與上海研謹(jǐn)生物即用型或濃縮型抗體配套使用。試劑盒不包括酶底物顯色劑，請另行購買與過氧化酶適配的DAB或AEC顯色系統(tǒng)。

    注意事項

 1. 以每張切片加入1滴（約50μl）計算，3ml可做60張切片，18ml可做360張切片。

2.對于內(nèi)源性生物素含量比較豐富的組織，使用本試劑盒時建議用內(nèi)源性生物素阻斷劑進(jìn)行封閉。

3.實驗過程中避免組織片干燥，因此各步孵育時工作液用量必需充足，保證*覆蓋組織樣本，且盡量在濕盒中進(jìn)行孵育。

4.為獲得Z佳實驗結(jié)果，請務(wù)必優(yōu)化實驗條件及試劑用量。

5.  本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體反應(yīng)或人體治療。  

使用方法

1.  常規(guī)處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細(xì)胞爬片等樣本。

1）組織切片或細(xì)胞爬片染色前處理：

a.石蠟切片

脫蠟水化：60ºC烤片1小時，二甲苯脫蠟二次，每次5分鐘；再依次浸入梯度乙醇（無水乙醇－無水乙醇－95%－85%－75%乙醇）和蒸餾水中各5分鐘水化。

 b.冰凍切片和細(xì)胞爬片

切片（或爬片）浸于0.01MpH7.4PBS洗滌3次×5分鐘。然后用0.1%TritonX-100覆蓋組織（或細(xì)胞）浸潤15分鐘，0.01MpH7.4PBS洗滌2次×5分鐘。

 2）石蠟切片的抗原修復(fù)：絕大大多數(shù)情況下，石蠟組織切片用檸檬酸緩沖液高壓修復(fù)都是適合的。修復(fù)工作液配制：1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩沖液（IHC抗原修復(fù)液,100×)（Cat#：K0128），混勻即可。修復(fù)過程：修復(fù)液加入高壓鍋內(nèi)，待修復(fù)切片浸于修復(fù)液中（必需沒過組織），蓋上壓力鍋蓋，加熱至均勻噴汽，

 從噴汽開始計時，1~2分鐘后壓力鍋離開熱源，自然冷卻至室溫，取出切片，蒸餾水淋洗后，再用PBS（0.01MpH7.4）漂洗2次，每次3分鐘。

 2.  滴加適量試劑1（內(nèi)源性過氧化物酶封閉液），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

3.  滴加適量試劑2（封閉用正常羊血清工作液），室溫孵育10分鐘，甩干。

4.  滴加適量一抗工作液（商品化即用型抗體或適當(dāng)比例稀釋的濃縮抗體），按實驗要求孵育，然后PBS充分淋洗。

5.  滴加適量試劑3（生物素標(biāo)記羊抗兔/鼠二抗工作液），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

6.  滴加適量試劑4（HRP標(biāo)記的鏈霉親和素），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

7.  滴加顯色工作液顯色（DAB或AEC）。

8.  復(fù)染，脫水透明，封片。

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