用細(xì)胞分離液分離組織中單核細(xì)胞方法
 

　　淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異，借助離心產(chǎn)生的重力加速度，進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液、Percoll淋巴細(xì)胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個(gè)核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。淋巴細(xì)胞分離液是由聚蔗糖、泛影酸葡甲胺、氫氧化鈉等配制成水溶液，經(jīng)滅菌而成。用于分離全血中淋巴細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)室常用的是用于分離人的淋巴細(xì)胞的試劑，如果需要分離其他動(dòng)物如小鼠的淋巴細(xì)胞，也有專門的淋巴細(xì)胞分離液。
 

　　用淋巴細(xì)胞分離液分離人組織中的單個(gè)核細(xì)胞方法：

　　1．取外科分離的各種組織，用含1％慶大霉素和1％小牛血清的MEM培養(yǎng)液洗滌組織塊，洗去可能的污染物。將組織塊置培養(yǎng)皿中，加入約為組織塊體積5~10倍的同樣MEM培養(yǎng)液。用無菌外科剪刀將組織塊剪碎成0.5mm3大小。

　　2．將組織塊轉(zhuǎn)移到小培養(yǎng)瓶中，靜置片刻，吸去培養(yǎng)液。加入約2倍組織塊體積的、濾過除菌的酶溶液。37℃水浴搖床中消化1～2小時(shí)，注意組織塊的消化程度。

　　3．當(dāng)組織塊消化分散后，用手用力搖晃培養(yǎng)瓶3～5分鐘或用大口吸管反復(fù)吹打，使細(xì)胞團(tuán)進(jìn)一步分散。加入30ml上述MEM培養(yǎng)液，終止酶反應(yīng)。

　　4．讓上述懸液通過200目的金屬網(wǎng)或尼龍網(wǎng)，分離單個(gè)細(xì)胞。用上述MEM培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，每次離心1000×g 10分鐘。用1％臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞活力并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

　　5．如果細(xì)胞量較多（>107），應(yīng)當(dāng)用上述淋巴細(xì)胞分離液分離出單個(gè)核細(xì)胞，并用含10％小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞配成適當(dāng)濃度。