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CCK-8試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反響的完結需求有一定的溫度，這一保溫進程稱為溫育，有人稱之為孵育，在本產品中似不恰當。
保溫的方法除有的附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將其置于水浴箱中，ELISA板底應貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，本產品應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，終將ELISA板放在濕紗布上。
CCK-8試劑盒步驟：
1、從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需酶標板孔數目，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、標準品和樣本加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL，空白孔不加。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、加酶：標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
5、配液：將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍后備用。
6、洗滌：小心揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次。
7、顯色：每孔加入底物A、B各50μL，輕輕震蕩混勻后，37℃避光孵育15min。
8、終止：每孔加入終止液50μL，終止反應，此時藍色立刻轉為黃色。
9、測定：以空白孔調零，15分鐘內在450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。
