流式細胞分選技術實驗服務

一.服務介紹

流式細胞分選技術是利用流式細胞分選儀。以高能量激光照射高速流動狀態下被熒光色素染色的單細胞或微粒，測量其產生的散射光和發射熒光的強度，從而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態等進行定性或定量檢測的一種現代細胞分析技術，它可根據發射光的熒光強度和波長將發光顆粒亞群分開并可實現單克隆分選，能復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類.定量和分離，單次可同時對其中-種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細胞芯片制備。分選后的細胞能直接用于培養、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等，可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。硬件中樣本細胞丟棄的比例低于5%，保證樣本中目標細胞的高回收率。

二、實驗原理

當經熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內。流動室內充滿鞘液,在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以-定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體， 充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當液滴流經過帶有幾千伏的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現細胞的分離。

三、實驗流程(以分選有核紅細胞為例)

1采抗凝血10 ml。

2.密度梯度分離單個核細胞層

(1)在短中管中加入適量淋巴細胞分離液。

(2)取肝素抗凝靜脈血與等量Hank's液或RPM11640充分混勻，用滴管沿管壁緩慢疊加于分層液面上,注意保持清楚的界面。水平離心2000 rpmx20分鐘。

(3)離心后管內分為三層，上層為血漿和Hank's液， 下層主要為紅細胞和粒細胞。中層為淋巴細胞分離液，在上、中層界面處有一-以單個核細胞為主的白色云層狹窄帶，單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞。此外， 還含有血小板。

(4)用毛細血管插到云霧層，吸取單個核細胞。置入另-短中管中,加入5倍以上體積的Hank's液或RPMI1640, 1500rpmx10分鐘，洗滌細胞兩次。

3.免疫熒光染色

將上一步得到的單個核細胞層按1x10/1的比例加入異硫青酸(FITC)標記的CD71單克隆抗體(鼠IgM).孵育30 min后重懸于0.5 ml PBS液中進行熒光染色。

4.FACS分選CD71陽性細胞。

四、服務說明

1.客戶提供血液樣本。

2.公司提供圖片和分離后的細胞。

3.實驗周期為2周左右，具體根據實驗內容而定。

五、質量承諾

提供清晰的圖片和分選后的細胞。

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