胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用: CHIP

實(shí)驗(yàn)意義：

染色體免疫沉淀技術(shù)(Chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)，用于闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑，CHIP可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以研究組蛋白的各種共價(jià)修飾

和基因表達(dá)之間的關(guān)系，在基因表達(dá)調(diào)控研究中發(fā)揮著重要的作用。CHIP是表觀遺傳信息研究的主要方法，是深入分析惡性腫瘤、癌癥、心血管疾病以及神經(jīng)退行性疾病等病理診斷和基礎(chǔ)與臨床研究的有效工具。

實(shí)驗(yàn)原理

染色體免疫沉淀技術(shù)(Chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)分析的是細(xì)胞內(nèi)生理狀態(tài)下DNA結(jié)合蛋白與基因組DNA相互作用的技術(shù)，也稱作結(jié)合位點(diǎn)分析法，通常用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)或者組蛋白特異性修飾位點(diǎn)的研究。基本原理是

在活細(xì)胞的狀態(tài)固定DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，然后通過免疫學(xué)的方法沉淀復(fù)臺(tái)物，特異性地富集純化后，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。后續(xù)的分析檢測(cè)可以通過定量PCR. Western Blot. CHIP-Seq. CHIP-chip (微陣列芯芯分析)。

實(shí)驗(yàn)流程

1.甲醇固定細(xì)胞:

2.超聲破碎; .

3.目的蛋白的抗體孵育:

4.加入Protein A,結(jié)合抗體靶蛋白-DNA復(fù)合物，沉淀:

5.洗脫后得到室集的靶蛋白-DNA復(fù)合物;

6.分離富集的DNA和蛋白質(zhì):

7.分析檢測(cè)。

結(jié)果展示

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)周期: 1-3個(gè)月

交付標(biāo)準(zhǔn): CHIP鑒定結(jié)果報(bào)告、 分析報(bào)告、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑、耗材、實(shí)驗(yàn)步驟)、原始數(shù)據(jù)等

實(shí)驗(yàn)需與客戶確認(rèn)的信息

1.目的基因與蛋白信息。

2、樣本類型與種屬

3、是否提供抗體

部分實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)